Продукты и услуги Информационно-правовое обеспечение ПРАЙМ Документы ленты ПРАЙМ Методические указания МУК 4.2.2428-08 “Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста” (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 октября 2008 г.)

Методические указания МУК 4.2.2428-08 “Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста” (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 октября 2008 г.)

Справка

Методические указания МУК 4.2.2428-08
“Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста”
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 октября 2008 г.)

Дата введения: 15 декабря 2008 г.

1. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок контроля и методы определения бактерий Enterobacter sakazakii - возбудителей пищевых токсикоинфекций у детей раннего возраста, при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при санитарно-эпидемиологическом расследовании вспышек пищевых отравлений и инфекций с пищевым путем передачи.

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также лабораторную диагностику заболеваний с пищевым путем передачи. Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Контролю на наличие бактерий Е. sakazakii подлежат детские молочные смеси и продукты прикорма сухие, а также специализированные продукты для лечебного и профилактического питания детей первого года жизни, при анализе которых на наличие патогенных микроорганизмов, в том числе сальмонелл, не были выявлены облигатные патогены, принадлежащие к родам Salmonella, Shigella, Yersinia, группам энтеровирулентных Escherichia coli, но выявлялся рост сопутствующей грамотрицательной неспорообразующей микрофлоры.

1.4. Необходимость контроля указанных групп продукции на наличие Е. sakazakii обусловлена регистрацией в последние годы документированных спорадических случаев и вспышек септических инфекций и некротизирующего энтероколита у детей I года жизни, в первую очередь недоношенных, новорожденных с низкой массой тела или иммунокомпромиссных. Все случаи заболеваний связаны с употреблением детских молочных смесей, контаминированных Е. sakazakii, том числе при очень низких уровнях возбудителя (1-10 КОЕ/г). При этом установлено, что в первую очередь Е. sakazakii может попадать в сухие молочные смеси с контаминированными ингредиентами, добавляемыми после сушки, или из окружающей среды в процессе упаковки готового продукта.

1.5. Предлагаемый метод определения бактерий Е. sakazakii в пищевых продуктах, предназначенных для детей раннего возраста, предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-2001 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе. Настоящие Методические указания также предусматривают определение количества Е. sakazakii в пищевых продуктах для детей раннего возраста методом наиболее вероятного числа (НВЧ).

1.6. Обнаружение Е. sakazakii в 300 г инстантных молочных смесей и продуктов прикорма сухих, предназначенных для детей 1 года жизни; или в 300 г сухих молочных смесей или специализированных продуктов для детей младше 6 месяцев, должно рассматриваться как присутствие патогенных бактерий в исследуемых образцах, свидетельствующее о высокой степени риска для детей данной возрастной категории, и служить основанием для запрета использования такой продукции с принятием соответствующих мер, направленных на обеспечение безопасности продуктов детского питания.

2. Сущность метода

2.1. Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii основан на высеве определенных количеств продукта в жидкие селективные среды для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae, с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективного агара, с последующим выделением чистой культуры. Ниже представлена методическая схема определения Е. sakazakii.

Таблица 1.

Схема исследования сухих детских смесей на наличие Е. sakazakii

Этап Продолжительность инкубации, ч температура
1. Подготовка реактивов и материалов        
2. Растворение навесок в стерильном фосфатном буфере (ФБР) в соотношении 1:10 (при необходимости определения количества - навесок массой 100, 10 и 1 г в 3 колбы или пробирки с ФБР каждая), смешивание и инкубация 18-24 36.С
3. Посев проинкубированной суспензии в селективный питательный бульон для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae и инкубация 18-24 36.С
4. Пересев 0,1 мл проинкубированного бульона для выделения Enterobacteriaceae на поверхность фиолетово-красного желчного агара с глюкозой (VRBG agar) или агар Эндо; 18-24 36.С
5. Отбор 5 подозрительных на E.sakazakii колоний с поверхности VRBG агара или Эндо, пересев на триптонсоевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA) и инкубация 48-72 25.С
6. Отбор колоний с желтым пигментом, микроскопия по Граму и подтверждение их видовой принадлежности.        
7. При необходимости - подсчет наиболее вероятного числа (НВЧ) по количеству положительных проб в каждой из засеянных навесок продукта.        

2.2. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность к виду Е. sakazakii. Подтверждение принадлежности к E.sakazakii производится путем получения развернутых биохимических характеристик штаммов. Допускается использование тест-систем для биохимической дифференциации энтеробактерий API 20E, Rapid 20E, ID 32E (ф. «БиоМерье», Франция) и др.

Определение биохимических характеристик, дифференцирующих Е. sakazakii от близкородственных представителей энтеробактерий Enterobacter cloacae и Pantoea agglomerans, приведены в табл. 2.

Таблица 2

Биохимическая дифференциация Enterobacter sakazakii

Тест или субстрат Реакции
Е. sakazakii Е. cloacae P. agglomerans
Лизиндекарбоксилаза - - -
Аргининдигидролаза + + -
Орнитиндекарбоксилаза + + (-)
Подвижность + + (+)
Утилизация цитратов + + +
Реакция с метиловым красным - - -
Реакция Фогес-Проскауэра + + (+)
Индол - - (-)
Глюкоза + + +
Лактоза + + (+)
Сахароза + + (+)
Дульцит - - (-)
Адонит - (-) -
Раффиноза (+) + (+)
D-сорбит - + (+)
альфа-метил-D-глюкозид + (+) -
мальтоза + + +
Маннит + + +
Разжижение желатины (22.С) - - +
Мукоидный рост + + +
Желтый пигмент при 24.С + - (+)

Примечания:

«+» - 90-100% штаммов положительные; «(+)» - 21-89% штаммов положительные;

«-» - 0-9% штаммов положительные; «(-)» - 10-24% штаммов положительные.

Ведущими дифференцирующими признаками Enterobacter sakazakii от других представителей вида Enterobacter являются способность к образованию желтого пигмента при культивировании на неселективных средах при оптимальной температуре 25.С и отсутствие ферментации D-сорбита. Для дифференциации E.sakazakii от сорбитвариабельных и обладающих желтым пигментом представителей рода Pantoea agglomerans (Syn: Erwinia spp.) используется тест разжижения желатины.

В качестве дополнительного теста при идентификации E.sakazakii возможно определение *-глюкозидазной активности на хромогенных средах, содержащих 4-нитрофенил-*-d-глюкопиранозид или 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-*,d-глюкопиранозид.

Нумерация разделов приводится в соответствии с источником

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

4.1. Аппаратура и инструментарий

Наименование аппаратуры и материалов Названия нормативных документов (ГОСТ, ТУ)
Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН+-0,01 ГОСТ 19881-74
Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160+-5).С ТУ 64-1-28-70-76
Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 37.С с отклонением от заданной +-1.С ТУ 64-1-1382-83
Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 41,5.С с отклонением от заданной +-1.С ТУ 64-1-1382-83
Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г ГОСТ 24104-88
Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС ГОСТ 8284-78
Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные ГОСТ 19569-89Е
Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с ГОСТ 6709-72
Гомогенизатор перистальтического типа «Микс-2», «Стомайкер», или других наименований AES Lab., Cat.N AESAP 1066
Гомогенизатор типа «вортекс»    
Микропипетки на 200-1000 мкл DIOHIT, Cat.N 720040 или «Ленпипет»
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов ТУ-16-535-84
Холодильник бытовой электрический ГОСТ 16317-87
Пинцет медицинский ГОСТ 21241-89
Ножницы медицинские ГОСТ 21239-89
Скальпель хирургический, 15 см ГОСТ 21240-89
Часы механические сигнальные ГОСТ 3145-84
Электроплитка ГОСТ 14919-83
Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания) ТУ 64-1-2451-78

Взамен ГОСТ 24104-88 постановлением РФ от 26 октября 2001 г. N 439-ст с 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001

4.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага фильтровальная лабораторная ГОСТ 12026-76
Марля медицинская ГОСТ 9412-77
Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости ГОСТ 1770-74
Воронки стеклянные ГОСТ 25336-82
Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 5556-81
Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 ГОСТ 29227-91
Пробирки типов П1, П2 ГОСТ 25336-82
Стекла предметные для микропрепаратов ГОСТ 6672-75
Спиртовки лабораторные стеклянные ГОСТ 23932-90
Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100.С (цена деления шкалы 1.С) ГОСТ 13646-68
Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов ГОСТ 23932-90
Пакеты стерильные для гомогенизатора AES Lab., Cat.N AES400/50G
Отраслевой стандарт для визуальной оценки мутности N 10 ГИСК им. Л.А. Тарасевича, МЗ РФ
Денситометр для бактериальных суспензий типа «Densi-La-Meter» или «Денсимат» ф. «Лахема», «BioMerieux»
стандарт Макфарланда NN 1, 2, 3 ф. «BioMerieux»
Петля бактериологическая    

4.3. Реактивы и питательные среды

Агар микробиологический ГОСТ 17206-84
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
D-глюкоза, ч. ГОСТ 6038-79
D-лактоза, 1-водная ТУ 6-09-22-98-79
Маннит    
D-сорбит    
Рамноза    
Калия гидроокись ГОСТ 24363-80
Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч. ГОСТ 4198-75
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный ГОСТ 2493-75
Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77
Литий хлористый, ч. или х.ч., или ч, д.а ГОСТ 4328-77
Масло иммерсионное для микроскопии ГОСТ 31739-78
Набор реактивов для окраски по Граму    
Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный, 4-водный, ч. или х.ч. ГОСТ 4170-78
Натрия гидроокись, ч.д.а ГОСТ 4328-77
Натрий лимоннокислый, 5,5-водный, ч.д.а ГОСТ 22280-75
Натрий хлористый, ч. или х.ч., или ч.д.а ГОСТ 4233-77
Пара-диметиламидобензальдегид, ч. ТУ 6-09-3272-77
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей ГОСТ 13805-76
Спирт этиловый ректификованный технический ГОСТ 18300-87
Спирт этиловый ректификованный ГОСТ 5962-67
Феноловый красный ГОСТ 5853-51
Фенолфталеин ГОСТ 5850-72
Фуксин основной ТУ 6-09-4119-75
Хлороформ технический ГОСТ 2-15-76-72
Уксусная кислота ГОСТ 61-75
Сульфаниловая кислота    
А-нафтол    
Цинк порошкообразный ГОСТ 3640
Желатин сухой    
Экстракт дрожжевой сухой    
Тест-штамм Entervbacter sakazakii, типичный по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам ГИСК им. Л.А. Тарасевича
Пептонная вода забуференная - (сухая)    
Триптозный ГРМ-агар и ГРМ-бульон ФС42-3377-97 (ГНЦПМ)
Питательный бульон и питательный агар ТУ 10-02-02-789-176-94
Триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA) HiMediaM1214
Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом (TSYEB) HiMediaM1263
Среды Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, рамнозой, дульцитом, адонитом, сахарозой, сорбитом ФС (ЦНИИВС им. И.И. Мечникова, НИИ питательных сред)
SIM-агар (сероводород-индол-подвижность) Difco
Среда Эндо ТУ 9229-072-00419785
Агар желчный фиолетово-красный ТУ 9229-072-00419785
Среда Кесслер с глюкозой ГОСТ 30519-97
Бульон Мак-Конки с глюкозой ГОСТ 30519-97
Бульон с желчью, бриллиантовым зеленым и глюкозой ГОСТ 30519-97
Тест-системы биохимические для видовой идентификации API 20E, Rapid 20E, ID 32Е для идентификации Enterobacteriaceae и других грамотрицательных палочек BioMerieux
Набор реактивов для окраски по Граму    
Набор для постановки оксидазного теста    

Примечание: Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками, прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000 или EN 29 000. Питательные среды и препараты отечественного производства должны вырабатываться по нормативной документации, утвержденной в установленном порядке.

5. Подготовка к анализу

5.1. Приготовление растворов и реактивов

5.1.1. Пептонно-солевой раствор По ГОСТ 26669-85
5.1.2. Изотонический (0,85%-ный водный) раствор хлорида натрия По ГОСТ 26669-85
5.1.4. Приготовление растворов и реактивов для окраски препаратов по Граму По ГОСТ 10444.1 или в соответствии с инструкцией по применению
5.1.6. Стерильный фосфатный буфер с рН 7,2+-0,1 КН2РО4 - 0,45 г, Na2HPO4 - 5,34 г в 1000 см3 дистиллированной H2О, стерилизовать при температуре 121.С в течение 30 мин

5.2. Приготовление питательных сред

5.2.1. Среды промышленного изготовления, поименованные в п. 4.3., готовят согласно прописям на этикетке или в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя.

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

5.2.4. Питательный агар с 5% глюкозы готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1-84 «Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов, питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе».

5.2.5. Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом, триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом.

Состав сред (г/л): ферментативный гидролизат казеина - 17,0; пептон соевый - 3,0; натрий хлористый - 5,0; фосфат калия однозамещенный - 2,5; глюкоза - 2,5; дрожжевой экстракт - 6,0; агар микробиологический (для TSYEA) - 15,0.

Компоненты растворяют в 1000 * дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают рН * и автоклавируют при 121.С в течение 15 мин.

Готовые среды разливают в стерильные колбы или пробирки и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8.С.

5.2.6. Среда для определения подвижности: 20 г гидролизата казеина ферментативного, 6 г пептона мясного ферментативного и 5 г агара растворяют в 1000 * дистиллированной воды, устанавливают рН *, разливают в пробирки по 5-7 * и стерилизуют при 121.С в течение 15 мин.

5.2.7. Среды Гисса с углеводами: 10 г пептона ферментативного и 5 г натрия хлористого растворяют в 1000 * дистиллированной воды и добавляют 10 г соответствующего углевода. Устанавливают рН *, вносят 10 мл индикатора Андреде (также возможно использование индикатора бромкрезолового пурпурного, «ВР» и др.), разливают в пробирки и стерилизуют при 112.С в течение 20 мин.

6. Отбор и подготовка проб к анализу

6.1. Отбор и подготовку проб продукции производят в соответствии с ГОСТ 26668-85 «Методы отбора проб для микробиологических анализов», ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов», МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов», ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96), Масса или объем отбираемых проб должны быть достаточными для проведения исследования на патогенные микроорганизмы и минимально вдвое превышать аналитический образец.

6.2. От продукции в потребительской таре пробы отбирают в количестве одной или нескольких единиц в зависимости от массы или объема потребительской тары, с тем, чтобы количество было достаточным для проведения анализа. От продукции в транспортной или потребительской таре больших размеров или неупакованной пробы отбирают из разных мест с различной глубины, включая поверхность.

6.3. Для микробиологических анализов пробы отбирают до взятия проб на физико-химические и органолептические анализы стерильным инструментом в стерильную посуду.

6.4. Первичный посев исследуемых проб продуктов на патогенные микроорганизмы проводят в соответствии с порядком, изложенным в МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

6.5. При отсутствии роста облигатных патогенов, принадлежащих к родам Salmonella, Shigella, Yersinia, группам энтеровирулентных Escherichia coli, но при обнаружении роста сопутствующей грамотрицательной неспорообразующей микрофлоры в нормируемых навесках исследуемых продуктов, от них отбирают дополнительные пробы (2 навески по 100 г при первичном посеве 100 г продукта, 2 невески по 125 г при первичном посеве 50 г, 2 навески по 137,5 при первичном посеве 25 г) и анализируют в соответствии с процедурой, изложенной в разделе 7.

7. Проведение анализа

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

7.2. Пробы продуктов массой 100 г, 125 г или 137,5 г вносят в фосфатный буферный раствор (ФБР) или изотонический раствор (п. 4.3.) в соотношении 1:9 по объему. Посевы термостатируют при температуре (*).С в течение (*) ч.

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

7.3. При количественном анализе общая масса (объем) навески должна быть не менее 400 г (*).

Из подготовленной по п. 6. пробы отбирают 4 навески (порции) продукта массой 100 г (*) каждая для анализа. Производят посев каждой из трех навесок (порций) в 900 * ФБР и перемешивают.

Из четвертой навески (порции) массой (объемом) 100 г (*) отбирают три навески (порции) продукта массой 10 г (*) и производят посев в 90 см3 ФБР и перемешивают. Из этой же пробы отбирают три навески (порции) продукта массой 1 г (*) и производят посев в 9 * ФБР. Для посева (при необходимости - предполагаемом высоком содержании Е. sakazakii в продукте) меньших количеств продукта - 0,1 г, 0,01 г делают десятикратно убывающие разведения навески массой 10 г, и вносят по 1 * (х 3) соответствующих разведений в 9 * ФБР.

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

7.2.1. После термостатирования проб продукта в среде для первичного накопления 10 * суспензии (1 * - при первичном засеве 1 г или 1 *)) пересевают в 90 * (9 *) жидких селективных сред для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae по ГОСТ 30519-97 - среду Кесслера с глюкозой, или глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью, или бульон Мак-Конки. Посевы термостатируют при температуре (*).С в течение (*) ч.

7.2.2. Из посевов после термостатирования, независимо от наличия или отсутствия признаков роста, делают пересев штрихом на поверхность чашек Петри с одной из агаризованных дифференциально-диагностических сред по п. 4.3., Допускается проводить пересев петлей штрихом. Чашки со средами предварительно подсушивают.

Посевы термостатируют при температуре (*).С в течение 24 ч.

7.2.3. При отсутствии роста на чашках с дифференциально-диагностическими средами типа агара Эндо или агара желчного фиолетово-красного анализ прекращают и дают заключение об отсутствии E.sakazakii в исследованной пробе.

7.3. При обнаружении на чашках лактозоположительных колоний дальнейшему изучению подвергают все обнаруженные варианты, для чего отбирают по 3 - 5 колоний каждого типа для их дальнейшего изучения.

7.4. Отобранные для исследования 3-5 характерных колоний пересевают на поверхность триптон-соевого агара с дрожжевым экстрактом по п. 4.3. и термостатируют при температуре 25.С в течение 72 часов. В качестве положительного контроля используют референс-штамм Е. sakazakii, типичный по фенотипическим свойствам.

7.5. Культуры, растущие на триптон-соевом агаре с образованием желтого или желто-коричневого пигмента, подвергают дальнейшему изучению для подтверждения принадлежности к Enterobacter sakazakii.

8. Подтверждение принадлежности выделенных культур к Enterobacter sakazakii

8.1. Подтверждение принадлежности выделенных культур проводят с применением тест-систем для биохимической идентификации API 20E, Rapid 20E, ID 32E.

8.2. К бактериям Enterobacter sakazakii относят культуры, имеющие характерные признаки роста на дифференциально-диагностических средах, при микроскопии по Граму окрашенные отрицательно, подвижные, оксидазоотрицательные, соответствующие комплексу признаков, указанных в таблице 2, имеющие желтый пигмент, не ферментирующие сорбит и не разжижающие желатину. Бактерии E.sakazakii обладают *-глюкозидазной активностью.

9. Учет результатов

9.1. Результаты оценивают по каждой исследованной пробе отдельно.

9.2. При получении положительного результата подтверждающего анализа дают заключение о выявлении Е. sakazakii в исследованной навеске (объеме) продукта.

При получении отрицательного результата дают заключение об отсутствии Е. sakazakii в исследованной навеске (объеме) продукта.

9.3. Учет результатов при количественном определении.

Результат оценивают по каждой исследованной пробе продукта отдельно. Регистрируют число положительных результатов в колбах и пробирках с посевами трех последовательно убывающих масс (объемов) продукта, в которых подтверждено наличие бактерий Е. sakazakii при пересеве на твердые питательные среды и последующей идентификации. В зависимости от получаемой комбинации положительных и отрицательных результатов для каждого значения массы (объема) продукта составляют трехзначное число (индекс), по которому, используя таблицу 1, приведенную в Приложении 1, находят наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий Е. sakazakii, соответствующее их содержанию в 1 г (*) продукта.

Для окончательного определения НВЧ бактерий Е. sakazakii в анализируемом образце учитывают значение первой выбранной для расчета индекса НВЧ массы (объема) продукта с подтвержденным наличием Е. sakazakii. Так, в случае, если расчет ведется от посева массы (объема) 100 г (*) (х 3) продукта, количество Е. sakazakii в 1 г (*) образца рассчитывается путем деления числа НВЧ, взятого из таблицы соответственно установленному индексу, на 100. В случае, когда в качестве первого значения для расчета выбрана масса (объем) 10 г (х 3), количество Е. sakazakii в 1 г (*) образца рассчитывается путем деления числа НВЧ из таблицы на 10.

Пример: Бактерии Е. sakazakii обнаружены в трех повторностях при посеве 100 г, в трех повторностях при посеве 10 г и в одной - при посеве 1 г.

Рис. 1

Результат по числу секторов с подтвержденным ростом бактерий Е. sakazakii из трех выбранных масс записывается как индекс 3:3:1, что соответствует НВЧ, равному 46 (таблица 1 Приложение 1). Соответственно, наиболее вероятное число бактерий Е. sakazakii составляет 0,46 КОЕ в 1 г продукта.

Если значение НВЧ по таблице 1 составляет величину более чем 110 КОЕ (индекс 3:3:3), исследование целесообразно повторить, используя более высокие разведения образца, в которых исходная концентрация продукта будет в 10 или 100 раз ниже, чем в первоначально выбранном значении.

10. Требования безопасности

Исследования пищевых продуктов на наличие Enterobacter sakazakii проводят в соответствии с СанПиН 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами».

11. Нормативные ссылки

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

10.1. ГОСТ 30519-97 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae».

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

10.3. ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) «Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований».

10.4. ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических исследований».

10.5. ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов».

10.6. ГОСТ 26670-91 «Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов».

10.7. ГОСТ 10444.1-84 «Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов, питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе».

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

10.15. СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».

10.16. СанПиН 1.2.731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами».

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

10.18. МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
Г.Г. Онищенко

Приложение 1

Таблица 1 - Таблица для расчета наиболее вероятного числа микроорганизмов

Число секторов с подтвержденным ростом Е. sakazakii. (из трех выбранных значений массы (объема) НВЧ КОЕ/г (см3) Действительное число микроорганизмов В 1 г (см3) с вероятностью
1,0 0,1 0,01 95% 99%
от до от до
0 0 0 <0,30 0,00 0,94 0,00 1,40
0 0 1 0,30 0,01 0,95 0,00 1,40
0 1 0 0,30 0,01 1,00 00 1,60
0 1 1 0,61 0,12 1,7 0,05 2,50
0 2 0 0,62 0,12 1,70 0,05 2,50
0 3 0 0,94 0,35 3,3 0,18 4,60
1 0 0 0,36 0,02 1,70 0,05 2,50
1 0 1 0,72 0,12 1,70 0,05 2,50
1 0 2 1,1 0,4 3,5 0,2 4,6
1 1 0 0,74 0,13 2,00 0,06 2,7
1 1 1 1,1 0,4 3,5 0,2 4,6
1 2 0 1,1 0,4 3,5 0,2 4,6
1 2 1 1,5 0,5 3,8 0,2 5,2
1 3 0 1,6 0,5 3,8 0,2 5,2
2 0 0 0,92 0,15 3,50 0,07 4,60
2 0 1 1,4 0,4 3,5 0,2 4,6
2 0 2 2,0 0,5 3,8 0,2 5,2
2 1 0 1,5 0,4 3,8 0,2 5,2
2 1 1 2,0 0,5 3,8 0,2 5,2
2 1 1 2,0 0,5 3,8 0,2 5,2
2 1 2 2,7 0,9 9,4 0,5 14,2
2 2 0 2,1 0,5 4,0 0,2 5,6
2 2 1 2,8 0,9 9,4 0,5 14,2
2 2 2 3,5 0,9 9,4 0,5 14,2
2 3 0 2,9 0,9 9,4 0,5 14,2
2 3 1 3,6 0,9 9,4 0,5 14,2
3 0 0 2,3 0,5 9,4 0,3 14,2
3 0 1 3,8 0,9 10,4 0,5 15,7
3 0 2 6,4 1,6 18,1 1,0 25,0
3 1 0 4,3 0,9 18,1 0,5 25,0
3 1 1 7,5 1,7 19,9 1,1 27,0
3 1 2 12 3 36 2 44
3 1 3 16 3 38 2 52
3 2 0 9,3 1,8 36,0 1,2 43,0
3 2 1 15 3 38 2 52
3 2 2 21 3 40 2 56
3 2 3 29 9 99 5 152
3 3 0 24 4 99 5 152
3 3 1 46 9 198 5 283
3 3 2 110 20 400 10 570
3 3 3 > 110                

Методические указания МУК 4.2.2428-08 “Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста” (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 октября 2008 г.)

Текст методических указаний приводится по официальному изданию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2008 г.

Для просмотра актуального текста документа и получения полной информации о вступлении в силу, изменениях и порядке применения документа, воспользуйтесь поиском в Интернет-версии системы ГАРАНТ: