Досье на проект

В соответствии с пунктом 13 Правил государственной регистрации генно-инженерно-модифицированных организмов, предназначенных для выпуска в окружающую среду, а также продукции, полученной с применением таких организмов или содержащей такие организмы, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации от 23.09.2013 N 839 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2013, N 39, ст. 4991; 2014, N 25, ст. 3317; 2017, N 28, ст. 4145; 2018, N 6, ст. 896), приказываю:

Утвердить прилагаемую Методику производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения.

Министр

Д.Н. Патрушев

Приложение

Утверждена
приказом Минсельхоза России
от ____________ N ____

Методика производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения

I. Общие положения

1.1. Настоящая методика устанавливает порядок проведения экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения (далее - ГМО, экспертиза).

1.2. Экспертиза проводится организацией (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации в целях выявления наличия либо отсутствия негативного воздействия на окружающую среду ГМО, предназначенного для выпуска в окружающую среду.

1.3. При проведении экспертизы должны учитываться результаты молекулярно-генетического исследования ГМО.

Заявитель предоставляет копию заключения о проведенных молекулярно-генетических исследованиях.

1.4. Заключение о результатах экспертизы должно быть составлено на основании протоколов испытаний ГМО и содержать:

наименование заключения;

наименование ГМО с указанием его таксономического статуса;

полное наименование, место нахождения, индивидуальный номер налогоплательщика (ИНН) юридического лица, осуществляющего на территории Российской Федерации генно-инженерную деятельность в целях создания ГМО (далее - заявитель);

полное наименование и место нахождения юридического лица либо фамилия, имя, отчество (при наличии), место жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя образцов ГМО, представленных на экспертизу;

- полное наименование и место нахождения организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;

- фамилии, имена, отчества (при наличии) лиц, проводивших экспертизу, ученая степень (звание) (при наличии), места их работы и должности;

- сведения о трансформационном событии (характеристики генетической модификации) в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;

- вид предполагаемого целевого использования ГМО;

- регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО);

- регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии);

- сведения о регистрации ГМО за рубежом (при наличии);

- оценку полноты представленных заявителем документов и данных;

- краткое содержание документов и данных, представленных заявителем для проведения экспертизы;

- перечень исследований ГМО с указанием их результатов;

- описание представленных заявителем на экспертизу образцов ГМО и исходного организма-реципиента с указанием их количества, а также оценку их пригодности для проведения исследований;

- место и номер депонирования (указывается для штаммов ГМО);

- выводы экспертизы о наличии или отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду;

- рекомендуемый срок действия свидетельства о государственной регистрации ГМО (в случае отсутствия сведений о негативном воздействии ГМО на окружающую среду);

- дату и номер заключения экспертизы;

- подпись руководителя организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;

- специальные условия использования ГМО (при наличии).

1.5. К заключению о результатах экспертизы должны прилагаться протоколы исследований ГМО, на основании которых оно составлено, подписанные руководителями организаций (испытательных лабораторий), осуществивших проведение исследований.

II. Экспертиза ГМО, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих жизнеспособный ГМО

2.1. Экспертиза ГМО для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих жизнеспособный ГМО, включает анализ представленных заявителем документов и данных:

а) наименования ГМО с указанием его таксономического статуса (на основании паспорта штамма, выданного уполномоченной коллекцией); полного наименования, места нахождения, идентификационного номера налогоплательщика (ИНН) заявителя; полного наименование и места нахождения юридического лица либо фамилии, имени, отчества (при наличии), места жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя образцов ГМО, представленных на экспертизу; вид предполагаемого целевого использования ГМО; регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО); места и номера депонирования депонированных штаммов ГМО; регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии) либо информации об отсутствии такого свидетельства;

б) сведений об исходном организме-реципиенте (таксономическая характеристика, описание способов размножения и распространения, данные о вирулентных, аллергенных и других биологических свойствах);

в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристику экспрессии встроенных или измененных генов;

г) сведений о трансформационном событии (характеристики генетической модификации) в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору, информацию о способе генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);

д) информации об организмах-донорах вносимых генов (таксономическая характеристика, данные о вирулентных, аллергенных и других их свойствах);

е) описания свойств, приобретенных ГМО в результате модификации;

ж) характеристики различий ГМО с исходным организмом-реципиентом, в том числе описание способа размножения и распространения, схемы культивирования, новых фенотипических свойств, биологических преимуществах модифицированного организма по сравнению с исходным организмом;

з) описания методик, позволяющих подтвердить таксономический статус ГМО и характеристику генетической модификации, описания нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов, состава и свойств стандартных образцов;

и) результатов изучения стабильности ГМО, в том числе в организмах животных, а также оценка способности к переносу генов, введенных в исходный организм-реципиент с использованием методов генной инженерии, в том числе генов устойчивости к антибиотикам, в другие организмы;

к) информации о путях и возможности передачи ГМО от вакцинированных животных к невакцинированным животным (для ГМО, предназначенных для производства вакцин);

л) информации о потенциальной колонизации ГМО в желудочно-кишечном тракте животных и его влиянии на естественную микрофлору (для ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

м) информации о результатах токсикологических исследований ГМО и рекомбинантных аминокислотных последовательностей, определяющих проявление заданных признаков у ГМО, в том числе о результатах субхронического токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах) и молодых продуктивных животных, о биоинформатическом анализе, поиске гомологии рекомбинантного белка с аминокислотными последовательностями токсических белков, белков, обладающих фармакологической или иной биологической активностью при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank (для ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

н) информации о результатах аллергологических исследований, в том числе о потенциальной аллергенности ГМО, о потенциальной аллергенности рекомбинантных аминокислотных последовательностей или небелковых веществ, полученных с использованием ГМО - продуцентов, в иммунохимических исследованиях in vitro;

о) информации об условиях промышленного культивирования ГМО;

п) информации о наличии или отсутствии регистрации ГМО и (или) лекарственных средств для ветеринарного применения, их содержащих, за рубежом, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения ГМО и лекарственных средств для ветеринарного применения, их содержащих;

р) копии заключения о результатах молекулярно-генетического исследования ГМО;

с) копий отчетов доклинических исследований лекарственного средства для ветеринарного применения, клинических исследований лекарственного препарата для ветеринарного применения, содержащих ГМО или полученных с его использованием (при наличии);

т) информации об исследовании безопасности ГМО для животных, о тканевом тропизме ГМО по сравнению с исходным организмом-реципиентом (при наличии);

у) информации о способности ГМО выживать и размножаться в окружающей среде; наличии в окружающей среде микроорганизмов - потенциальных реципиентов рекомбинантной ДНК в результате горизонтального переноса; о возможности переноса рекомбинантных генов из разрушенных вирусных частиц или плазмидной ДНК ГМО клеток в другие виды организмов; о потенциальном антагонистическом, синергическом или другом влиянии ГМО на организмы, не являющиеся генно-инженерно-модифицированными (при наличии);

ф) информации о результатах других исследований ГМО (при наличии);

х) протоколов исследований, указанных в пункте 2.2. настоящей методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации (при наличии).

2.2. В отношении ГМО, предназначенного для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих жизнеспособный ГМО, должны быть проведены следующие исследования в сравнении с исходным организмом - реципиентом:

а) исследования цитопатического действия ГМО на клеточные культуры;

б) исследования микробиологических свойств ГМО-бактерий, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных;

в) исследования стабильности ГМО-бактерий, простейших, грибов;

г) исследования стабильности ГМО-вирусов;

д) исследования патогенных свойств и вирулентности ГМО на лабораторных животных;

е) исследования жизнестойкости ГМО на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке;

ж) исследования тканевого тропизма ГМО на вакцинированных животных;

з) исследования адгезивности ГМО методом гемагглютинации эритроцитов животных (в отношении ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

и) исследования инвазивности ГМО с помощью кератоконъюнктивальной пробы (ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

к) исследования антагонистической или симбиотической активности ГМОс представителями резидентной микрофлоры кишечника (в отношении ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

л) иммунологических исследований ГМО (в отношении ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

м) исследования безопасности использования ГМО на животных-реципиентах.

Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих жизнеспособный ГМО, приведены в приложении к настоящей методике.

2.3. В случае если протоколы исследований, указанные в подпункте "х" пункта 2.1. настоящей методики, не представлены заявителем, соответствующие исследования образцов ГМО и исходного организма-реципиента проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей экспертизу.

2.4. Срок проведения экспертизы не должен превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 2.1. настоящей методики, в организацию (испытательную лабораторию), осуществляющую проведение экспертизы.

Если исследования, предусмотренные пунктом 2.2. настоящей методики, проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не должен превышать 250 рабочих дней с момента представления заявителем образцов ГМО и исходного организма-реципиента в организацию (испытательную лабораторию), осуществляющую проведение экспертизы.

2.5. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 1 приложения к настоящей методике, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду в случае отсутствия изменений в сторону ухудшения состояния окружающей среды по сравнению с воздействием на нее немодифицированного микроорганизма.

В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО, в том числе при производстве конкретного лекарственного средства для ветеринарного применения, при соблюдении которых негативное воздействие ГМО на окружающую среду отсутствует.

2.6. Если ГМО не соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 1 приложения к настоящей методике, заявителю должно быть выдано заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

2.7. Если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные подпунктами "а"-"р" пункта 2.1. настоящей методики, и (или) образцы ГМО и исходного организма-реципиента, пригодные для проведения исследований, в количестве, необходимом для проведения исследований (в случае, предусмотренном пунктом 2.2. настоящей методики), экспертиза не должна проводиться. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации, в которую обратился заявитель для проведения экспертизы, в срок, не превышающий 20 рабочих дней с момента обращения заявителя в указанную организацию.

III. Экспертиза ГМО для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих нежизнеспособный ГМО

3.1. Экспертиза ГМО для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих нежизнеспособный ГМО, включает анализ представленных заявителем документов и данных, предусмотренных подпунктами "а"-"ж", "р"-"у" пункта 2.1. настоящей методики, а также:

а) информации о нежизнеспособности ГМО в лекарственном средстве для ветеринарного применения;

б) протоколов исследований, указанных в пункте 3.2. настоящей методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях).

3.2. В отношении ГМО, предназначенных для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих нежизнеспособный ГМО, проводятся следующие исследования образцов лекарственного средства для ветеринарного применения, содержащих нежизнеспособный ГМО (далее - образцы лекарственного средства), представленных заявителем в количестве, необходимом для проведения исследований:

а) исследования образцов лекарственного средства на отсутствие жизнеспособного ГМО с использованием микробиологических (вирусологических) методов;

б) исследования по изучению безопасности использования образцов лекарственного средства, содержащих нежизнеспособные ГМО для животных - реципиентов.

Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих нежизнеспособный ГМО, приведены в приложении к настоящей методике.

3.3. В случае если протоколы исследований, указанные в подпункте "б" пункта 3.1. настоящей методики, не представлены заявителем, соответствующие исследования образцов лекарственного средства проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей экспертизу.

3.4. Срок проведения экспертизы не должен превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 3.1. настоящей методики, в организацию (испытательную лабораторию), осуществляющую проведение экспертизы.

Если исследования, предусмотренные пунктом 3.2. настоящей методики, проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не должен превышать 250 рабочих дней с момента представления заявителем образцов ГМО и исходного организма-реципиента в организацию (испытательную лабораторию), осуществляющую проведение экспертизы.

3.5. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 2 приложения к настоящей методике, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду в случае отсутствия изменений в сторону ухудшения состояния окружающей среды по сравнению с воздействием на нее немодифицированного микроорганизма.

В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО, в том числе при производстве конкретного лекарственного средства для ветеринарного применения, при соблюдении которых негативное воздействие ГМО на окружающую среду отсутствует.

3.6. Если ГМО не соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 2 приложения к настоящей методике, заявителю должно быть выдано заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

3.7. Если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные подпунктами "а"-"ж" пункта 2.2. настоящей методики, "о", "п" пункта 2.1. настоящей методики и подпункта "а" пункта 3.1. настоящей методики, и (или) образцы ГМО и исходного организма-реципиента, пригодные для проведения исследований, в количестве, необходимом для проведения исследований (в случае, предусмотренном пунктом 3.2. настоящей методики), экспертиза не должна проводиться. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации, в которую обратился заявитель для проведения экспертизы, в срок, не превышающий 20 рабочих дней с момента обращения заявителя в указанную организацию.

Приложение
к методике производства экспертиз (исследований) биологической безопасности
генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства
лекарственных средств для ветеринарного применения

Требования
к проведению исследований, предусмотренных методикой производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства лекарственных средств для ветеринарного применения и показатели (условия) безопасности ГМО

1. Требования к проведению исследований в отношении генно-инженерно-модифицированных микроорганизмов и вирусов, предназначенных для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих жизнеспособный штамм ГМО, и показатели (условия) безопасности ГМО:

а) определение эффекта цитопатического действия на клеточные культуры (фибробласты куриных эмбрионов, культуры СНО, NIH, 3T3, HEK-293) должно проводиться в отношении генно-инженерно-модифицированных вирусов, используемых для производства живых вакцин. Величина эффекта цитопатического действия (ЦПД50) для штамма ГМО не должна значительно отличаться от ЦПД50 родительского немодифицированного штамма;

б) исследования микробиологических свойств, определения чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных должны проводиться в отношении штаммов генно-инженерно-модифицированных бактерий. Свойства штамма ГМО не должны отличаться от свойств родительского немодифицированного штамма в части не затронутой генетической модификацией, в том числе ГМО штамм не должен быть устойчив к большему спектру антибиотиков. Для биохимической идентификации ГМО и родительского штамма исследование должно проводиться с помощью диагностических панелей, разрешенных к использованию в установленном порядке. Основой для выбора антибактериальных препаратов, подлежащих включению в исследование, являются данные о природной устойчивости или чувствительности отдельных видов ГМО, данные о резистентности родительского штамма, о распространении среди них приобретенной резистентности, а также о клинической эффективности антибиотиков. Для определения чувствительности к антибиотикам должен быть использован метод серийных разведений и диффузионный метод;

в) стабильность фенотипических свойств ГМО-бактерий, простейших, грибов должна проверяться при пассировании исследуемых штаммов на жидких и плотных питательных средах с тестированием биохимических свойств через 5-7 пассажей;

г) исследования стабильности ГМО-вирусов должны проводиться на культуре клеток или в живых организмах при последовательных пассажах ГМО и родительского немодифицированного штамма (не менее 5-7 пассажей). Безопасными являются штаммы ГМО, не изменившие вирулентных свойств (клинических изменений, отрицательных реакций на введение) после шестикратного пассирования;

д) исследования патогенных свойств и вирулентности на лабораторных животных должны проводиться на свободных от специфических патогенов (далее - SPF) мышах, цыплятах с определением летальной дозы для 50% лабораторных животных. Определение ЛД50 проводится путем внутрибрюшинного введения по 0,1 см3 живой суточной культуры исследуемого штамма, в концентрации 1х10(9), 1х10(7), 1х10(5) и 1х10(3) КОЕ/см3. Каждую группу животных помещают в отдельную клетку и наблюдают в течение 10 дней за гибелью животных. В качестве контролей используют группы животных, которым внутрибрюшинно вводят: стерильный физиологический раствор или вирулентный штамм с установленной дозой ЛД50.. По завершении эксперимента подсчитывают гибель животных в каждой группе и определяют ЛД50. Если ЛД50 равна 5х10(8) КОЕ/см3 и более штамм считают авирулентным. ГМО должен быть не менее безопасен, чем родительский не модифицированный штамм;

е) исследование жизнестойкости ГМО на моделируемых объектах окружающей среды, должно проводиться, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке. Стабильность ГМО в окружающей среде должна быть аналогичной стабильности родительского микроорганизма;

ж) исследование тканевого тропизма ГМО должно проводиться с использованием вакцинированных животных путем выделения (изолирования) ГМО из лейкоцитов, селезенки, тимуса и других органов животных. ГМО должен выделяться из тех же тканей, что и немодифицированный родительский микроорганизм;

з) определение адгезивности ГМО, предназначенных для производства пробиотиков, должно проводиться методом гемагглютинации эритроцитов. При выявлении выраженной гемагглютинационной активности должно проводиться определение адгезивности в присутствии D-маннозы для определения маннозо-чувствительной или маннозорезистентной адгезии. Количественное определение адгезии должно проводится in vivo при использовании биологических моделей. По степени адгезивности штаммы оцениваются следующим образом:

- высокоадгезивные с коэффициентом адгезии 3,0 и выше;

- адгезивные - с коэффициентом адгезии от 1 до 3,0;

- слабоадгезивные - с коэффициентом адгезии от 0,001 до 0,999. Слабоадгезивные штаммы, как правило, авирулентны, а адгезивные и высоко адгезивные штаммы обычно обладают определенными вирулентными свойствами. ГМО штамм должен иметь коэффициент адгезии не более 0,9, и должен быть равен или быть меньше коэффициента адгезии родительского штамма;

и) определение инвазивности ГМО, предназначенных для производства пробиотиков, с помощью кератоконъюнктивальной пробы должно осуществляться путем внедрения ГМО в эпителиальные клетки конъюнктивы и роговицу и размножения в них. ГМО, родительский штамм и контрольный (немодифицированный аналог пробиотика) штамм того же вида, не должны вызывать поражения конъюнктивы и роговицы, иметь выраженные инвазивных свойств. В случае выраженных инвазивных свойств ГМО не должен использоваться при производстве пробиотиков;

к) при определении антагонистической или симбиотической активности ГМО, предназначенных для производства пробиотиков, с представителями резидентной микрофлоры кишечника в качестве контрольных штаммов должен использоваться немодифицированный аналог пробиотического штамма того же вида, родительский штамм и штаммы микроорганизмов, представляющие основные виды резидентной кишечной микрофлоры животных - реципиентов (грамположительные: облигатно-анаэробные бактерии - лактобактерии, бифидобактерии, пептостептококки; грамотрицательные: облигатно-анаэробные бактерии, бактероиды, факультативно-анаэробные микроорганизмы, кишечная палочка, стафилококки, стрептококки, дрожжеподобные грибы рода Candida). Из выращенных на плотных или жидких питательных средах контрольных штаммов в присутствии ГМО (родительского штамма или немодифицированного аналога пробиотического штамма того же вида), готовятся взвеси микроорганизмов, вносится по 0,5 см3 10(1), 10(3) и 10(5) КОЕ/см3 каждого штамма в пробирки с жидкой питательной средой по 3,0 см3, на которой способны расти все исследуемые микроорганизмы. Параллельно осуществляются посевы контрольных штаммов на селективные питательные среды в тех же разведениях для точного подсчета клеток каждого вида микроорганизма. Через 6 и 24 часов осуществляются посевы смеси микроорганизмов на селективные питательные среды и подсчитывается количество клеток представителя резидентной микрофлоры и ГМО. Контрольными являются посевы, в которых выращивается только представитель резидентной микрофлоры или ГМО. Вычисляется число клеток представителя резидентной микрофлоры, выращенного в присутствии ГМО и отдельно.

При приблизительно одинаковом соотношении числа выросших клеток отдельно и в присутствии ГМО считается, что ГМО не обладает антагонистическим действием;

- при более высоких показателях числа выросших клеток при совместном выращивании, считается, что виды характеризуются симбиотическим действием;

- при снижении количества клеток представителя резидентной микрофлоры в 5 и более раз, в смеси с ГМО, характеризует антагонистическое действие ГМО на конкретного представителя нормальной микрофлоры кишечника животных - реципиентов. В случае если такое антагонистическое действие ГМО проявляется к большинству из исследованных представителей нормальной микрофлоры кишечника животного, ГМО не должен использоваться при производстве пробиотиков. При выявлении антагонистического действия ГМО к одному - двум представителям нормальной микрофлоры кишечника оцениваются результаты исследований антагонистической активности родительского штамма, проводятся исследования in vivo, и молекулярно-генетические исследования по выявлению генов, детерминирующих данный феномен;

л) иммунологические исследования ГМО, предназначенных для производства пробиотиков, должны проводиться в эксперименте на мышах линий СВА (высокочувствительны к введению эритроцитов барана и не чувствительны к гистамину и Salmonella typhimurium) и С57Bl/6 (низкочувствительны к введению эритроцитов барана, чувствительны к гистамину и Salmonella typhimurium) и включают изучение иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам: действие на гуморальное звено иммунитета в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана; действие на клеточное звено иммунитета в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана; действие как сенсибилизирующего агента в тесте чувствительности к гистамину; действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium, а также проведение дополнительных испытаний пробиотических средств в зависимости от родовой (видовой) принадлежности ГМО:

Род (вид) ГМО	Потенциальный фактор риска	Исследования
Плесневые грибы	Продукция микотоксинов; антибиотиков	Определение микотоксинов и антибиотиков в пробиотическом препарате
Дрожжи-сахаромицеты	Избыточная продукция этанола; аллергенность	Определение концентрации этанола в пробиотическом препарате; исследования аллергенности
Стрептомицеты	Продукция антибиотиков	Определение антибиотиков в пробиотическом препарате
Споровые бациллы	Избыточная протеолитическая и гемолитическая активности; образование антибиотических веществ	Тесты на острую токсичность пробиотического препарата; гемолиз эритроцитов под воздействием ГМО; определение антибиотиков в пробиотическом препарате
Энтерококки	Образование N- нитрозаминов, гистамина; антибиотико-устойчивость	Определение гистамина, N- нитрозаминов; выявление генов устойчивости к ванкомицину и рифампицину
Лактобациллы гетеро ферментативные	Избыточное образование D(-) молочной кислоты в продукте	Определение концентрации D(-) молочной кислоты в пробиотическом препарате

ГМО должен быть не менее безопасен, чем родительский не модифицированный штамм.

м) исследования безопасности использования ГМО на животных-реципиентах осуществляются путем введение иммунобиологического препарата, содержащего ГМО животным-реципиентам в десятикратной дозе. Наблюдения должны проводиться в течение месяца. В протоколе исследования регистрируется персистенция и выделение ГМО из организма подопытных животных, падеж, клиническое состояние, клинические и биохимические показатели крови, местную реакцию на введение лекарственного средства. Введение подопытным животным лекарственного средства не должно вызывать детектируемых клинических изменений. Изменения показателей крови не должны критически отклоняться от нормы. Не должны выявляться патологоанатомические изменения при вскрытии.

2. Требования к проведению исследований в отношении генно-инженерно-модифицированных микроорганизмов и вирусов, предназначенных для производства лекарственных средств для ветеринарного применения, содержащих нежизнеспособный ГМО, и показатели (условия) безопасности ГМО:

а) исследования, подтверждающие отсутствие в образцах лекарственного средства жизнеспособного ГМО должны проводиться с использованием стандартных микробиологических (вирусологических) методов. В качестве контрольных посевов/пассажей используется живая культура штамма;

б) исследования по изучению безопасности использования образцов лекарственного средства, содержащих нежизнеспособный ГМО, для животных - реципиентов должны проводиться путем введения животным десятикратную дозу лекарственного средства. Наблюдения проводятся в течение месяца. В протоколе исследования регистрируется падеж, клиническое состояние животных, гематологические и биохимические показатели крови, локальные аллергические реакции на введение препарата. Введение животным курса лекарственного средства на основе ГМО не должно вызывать детектируемых клинических изменений, показатели крови также не должны значительно отклоняться от нормы, не должно выявляться патологоанатомических изменений при вскрытии.