Методические указания МУК 4.1.2483-09 "Определение непищевых красителей судан I, судан II, судан III, судан IV и para red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище"(утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.)

Справка

Методические указания МУК 4.1.2483-09
"Определение непищевых красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище"
(утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Введены впервые

Введение

Красители Судан I, Судан И, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) (далее - Судан I-IV и Para Red) в сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов, и относятся к непищевым красителям.

Необходимость определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) обусловлено их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.

1. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных давках# к пище (БАД) и других пищевых продуктов (в состав которых входят специи и пряности).

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Присутствие непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.

2. Краткая характеристика красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред)

Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются синтетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющих интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведена на рис. 1.

Рис. 1 Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред).

3. Принцип метода определения красителей Судан I-IV и Para Red

Обнаружение и определение содержания непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) проводится методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектированием (при длине волны 504 нм). В качестве арбитражного метода используют метод ВЭЖХ с масс-детектированием (по молекулярным и дочерним ионам, - см. таблицу 1).

Таблица 1

Параметры масс-детектирования представлены

+-----------------------------------------------------------------------+
.  Наименование  .  Молекулярные   .   Энергия   .  Основные дочерние   .
.                .    ионы, m/z    . разрушения  .      ионы, m/z       .
+----------------+-----------------+-------------+----------------------.
.Para Red        .  294 (М+Н(+))   .          0,9.    277.    156.     -.
+----------------+-----------------+-------------+-------+-------+------.
.Судан-I         .  249 (М+Н(+))   .          1,0.    232.    156.     -.
+----------------+-----------------+-------------+-------+-------+------.
.Судан-II        .  277 (М+Н(+))   .          1,2.    260.    156.   120.
+----------------+-----------------+-------------+-------+-------+------.
.Судан-III       .  352 (М+Н(+))   .          1,2.    197.    336.   156.
+----------------+-----------------+-------------+-------+-------+------.
.Судан-IV        .  382 (М+Н(+))   .          1,2.    224.    364.   156.
+-----------------------------------------------------------------------+

4. Средства измерения, материалы и реактивы

- Высокоэффективный жидкостной хроматограф.

- Хроматографическая колонка C18, *, 4,6x250 мм.

- Ультразвуковая баня.

- Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью +0.0001 г.

- Дистиллятор.

- Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы.

- рН-метр лабораторный.

- Центрифуга лабораторная ОПН-8 8000 об/мин.

- Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

- Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-10 или 2-2-2-10 или 3-2-2-10 по ГОСТ 29227.

- Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2 по ГОСТ 1770-74.

- Вода дистиллированная.

- Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

- Тетрагидрофуран для жидкостной хроматографии.

- Трифторуксусная кислота квалификации "ОСЧ".

- Ацетон квалификации "ХЧ".

5. Определение содержания Суданов I-IV и Para Red методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

5.1. Подготовка стандартных растворов

Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95% этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этого объем доводят до метки 95% этанолом (основной раствор). В мерную колбу на 50 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95% этанолом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.

5.2. Подготовка проб для анализа

Около 1,0 г (точная навеска) образца помещают во флакон, объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 минут. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6000 об/мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95% добавленного количества каждого из исследуемых красителей.

5.3. Приготовление подвижной фазы

При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до рН=2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2-8 С не более 3 месяцев.

5.4. Проведение анализа ВЭЖХ

Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя, УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов.

Идентификация красителей Судан I-IV и Para Red только по времени удерживания не будет являться достоверной, ввиду сложного матрикса исследуемых объектов, и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хроматографическим поведением.

5.5. Условия хроматографического анализа:

Колонка * С18(2), *, 4,6х250 мм

Приготовление подвижной фазы: бидистиллированную воду доводят трифторуксусной кислотой до рН 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды)

Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН=2,4 (Б). Оптимальным является градиентное элюирование смесью ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН=2,4 (Б): 0 мин. - 80% (А), 10 мин.- 98% (А) (градиент линейный), 20 мин. - 98% (А), 21 мин. - 80% (А). Регенерация колонки занимает не менее 9 мин. Общее время анализа составляет 30 минут.

В случае использования только диодно-матричного детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до рН=2,4 допускается использование бидистиллированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью ацетонитрила-бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90-95% (в зависимости от параметров колонки).

Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон.

Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 *

Детектирование: * нм.

Объем вводимой пробы 5 мкл.

Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведены в таблице 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red представлен на рисунке 2.

Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается, поскольку они являются не пищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан 1-4 и Пара Ред приведены в Таблице 2.

Таблица 2

Пределы обнаружения непищевых красителей Судан 1-4 и Пара Ред в специях, пряностях, продуктах их переработки и БАД к пище.

+-----------------------------------------------------------------------+
. N .  Наименование   .  Предел обнаружения на  .        Предел         .
.   .    красителя    . диодной матрице, мг/кг  . обнаружения на масс-  .
.   .                 .                         .   детекторе, мг/кг    .
+---+-----------------+-------------------------+-----------------------.
. 1 .Para Red         .           0,5           .          0,5          .
+---+-----------------+-------------------------+-----------------------.
. 3 .Судан-I          .           0,5           .          0,5          .
+---+-----------------+-------------------------+-----------------------.
. 2 .Судан-II         .           0,5           .          0,5          .
+---+-----------------+-------------------------+-----------------------.
. 4 .Судан-III        .           0,5           .          0,5          .
+---+-----------------+-------------------------+-----------------------.
. 5 .Судан-IV         .           0,5           .          0,5          .
+-----------------------------------------------------------------------+

Количественное определение*

Количественное определение проводят абсолютной градуировкой.

Содержание красителей Судан I-IV и Para Red проводят по следующей формуле:

*, где:

С, мг/кг - содержание красителя, мг/кг.

С1 - концентрация красителя в стандартном растворе, мкг/мл.

S1 - площадь пика красителя в стандартном растворе.

S2 - площадь пика красителя в определяемом образце.

V - объем раствора образца, мл.

m - масса навески, г.

Таблица 3

Основные метрологические показатели

+-----------------------------------------------------------------------+
.N . Наименование .     Граница относительной      .    Стандартное     .
.  .              . погрешности (+-дельта) в % при .     отклонение     .
.  .              .             Р=0,95             .   повторяемости    .
.  .              .                                .    (сигма_r) %     .
+--+--------------+--------------------------------+--------------------.
.1 .Para Red      .              2,1               .        3,2         .
+--+--------------+--------------------------------+--------------------.
.3#.Судан-I       .              3,6               .        3,5         .
+--+--------------+--------------------------------+--------------------.
.2 .Судан-II      .              2,8               .        3,8         .
+--+--------------+--------------------------------+--------------------.
.4 .Судан-III     .              3,3               .        4,9         .
+--+--------------+--------------------------------+--------------------.
.5 .Судан-IV      .              3,9               .        4,3         .
+-----------------------------------------------------------------------+

Таблица 4

Параметры определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red

+-----------------------------------------------------------------------+
.   N   .          Наименование          .            Время             .
.       .                                .         удерживания,         .
.       .                                .             мин.             .
+-------+--------------------------------+------------------------------.
.   1   .Para Red                        .             6,2              .
+-------+--------------------------------+------------------------------.
.  3#   .Судан-I                         .             7,5              .
+-------+--------------------------------+------------------------------.
.   2   .Судан-II                        .             10,9             .
+-------+--------------------------------+------------------------------.
.   4   .Судан-III                       .             12,9             .
+-------+--------------------------------+------------------------------.
.   5   .Судан-IV                        .             15,5             .
+-----------------------------------------------------------------------+

Рис. 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red.

______________________________

* проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается.

---

Методические указания МУК 4.1.2483-09 "Определение непищевых красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище" (утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 5 февраля 2009 г.)

Текст документа приводится по официальному изданию (Москва, 2009 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В.А. Тутельян, к.т.н. В.Г. Байков, к.х.н. В.В. Бессонов, Ю.В. Ведищева, к.ф.н. О. И. Передеряев., Е.П. Хромченкова)

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 3 от 25.12.2008)

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 05.02.2009

4. Введены впервые