Досье на проект

В соответствии с пунктом 13 Правил государственной регистрации генно-инженерно-модифицированных организмов, предназначенных для выпуска в окружающую среду, а также продукции, полученной с применением таких организмов или содержащей такие организмы, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации от 23.09.2013 N 839 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2013, N 39, ст. 4991; 2014, N 25, ст. 3317; 2017, N 28, ст. 4145; 2018, N 6, ст. 896), приказываю:

Утвердить прилагаемую Методику производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов для производства кормов и кормовых добавок.

Министр

Д.Н. Патрушев

Приложение
УТВЕРЖДЕНА
приказом Минсельхоза России
от N           

Методика
производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов для производства кормов и кормовых добавок

I. Общие положения

1.1. Настоящая методика устанавливает порядок проведения экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок (далее - ГМО, экспертиза).

Экспертиза осуществляется в отношении кормов и кормовых добавок после предоставления документов о соответствии продукции требованиям, предъявляемым к кормам и кормовым добавкам, не полученным с использованием и/или содержащим ГМО.

1.2. Экспертиза проводится организацией (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации, в целях выявления наличия либо отсутствия негативного воздействия на окружающую среду ГМО, предназначенного для выпуска в окружающую среду.

1.3. При проведении экспертизы должны учитываться результаты молекулярно-генетического исследования ГМО.

1.4. Заключение о результатах экспертизы должно быть составлено на основании протоколов исследований ГМО и содержать:

наименование заключения;

наименование ГМО с указанием его таксономического статуса;

полное наименование, место нахождения, индивидуальный номер налогоплательщика (ИНН) юридического лица, осуществляющего на территории Российской Федерации генно-инженерную деятельность в целях создания ГМО (далее - заявитель);

полное наименование и место нахождения юридического лица либо фамилия, имя, отчество (при наличии), место жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя ГМО, представленного на экспертизу;

полное наименование и место нахождения организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;

фамилии, имена, отчества (при наличии) лиц, проводивших экспертизу, ученая степень (звание) (при наличии), места их работы и должности;

сведения о трансформационном событии (характеристики генетической модификации) в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;

вид предполагаемого целевого использования ГМО;

регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО);

регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии).

сведения о регистрации ГМО за рубежом (при наличии);

оценку полноты представленных заявителем документов и данных;

краткое содержание документов и данных, представленных заявителем для проведения экспертизы;

перечень исследований ГМО с указанием их результатов;

описание представленных заявителем на экспертизу образцов ГМО и исходного организма-реципиента (традиционного аналога ГМО) с указанием их количества, а также оценку их пригодности для проведения исследований;

место и номер депонирования (указывается для депонированных штаммов ГМО);

выводы экспертизы о наличии или отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду;

рекомендуемый срок действия свидетельства о государственной регистрации ГМО (в случае отсутствия сведений о негативном воздействии ГМО на окружающую среду);

дату и номер заключения экспертизы;

подпись руководителя организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы

1.5. К заключению о результатах экспертизы должны прилагаться протоколы исследований ГМО, на основании которых оно составлено, подписанные руководителями организаций (испытательных лабораторий), осуществивших проведение исследований.

II. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов.

2.1. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, включает анализ представленных заявителем документов и данных:

а) сведений об исходном организме (таксономическая характеристика, описание способов размножения и распространения, данные о вирулентных и аллергенных свойствах);

б) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристику экспрессии встроенных или измененных генов;

в) информацию о способе генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);

г) кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий, информации о депонировании ГМО-штамма (номер, наименование коллекции Российской Федерации);

д) информацию о вносимых генах (для организмов-доноров приводится таксономическая характеристика, данные о вирулентных, аллергенных и других свойствах);

е) характеристики различий ГМО с исходным организмом, в том числе описание способа размножения и распространения, схема и условия промышленного культивирования (состав сред), новых фенотипических свойств, биологических преимуществах модифицированного организма по сравнению с исходным организмом;

ж) описания методики, позволяющей идентифицировать генетическую модификацию (с указанием нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов, условий проведения полимеразной цепной реакции, далее - ПЦР);

з) результатов изучения возможности переноса генов, введенных в заявленный организм с использованием методов генной инженерии, в том числе генов устойчивости к антибиотикам, в микроорганизмы желудочно-кишечного тракта целевых животных;

и) информации о потенциальной колонизации ГМО в желудочно-кишечном тракте целевых животных и влиянии на естественную микрофлору (для ГМО, предназначенных для производства пробиотических кормовых добавок);

к) информации о способности ГМО выживать и размножаться в окружающей среде; о потенциальном антагонистическом, синергическом или другом негативном влиянии ГМО на организмы, не являющиеся генно-инженерно-модифицированными (при наличии);

л) копии отчетов исследований кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные штаммы ГМО (при наличии);

м) информацию о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, в государствах-членах Евразийского экономического союза, иных государствах, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения ГМО, кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов;

н) протоколы молекулярно-генетических исследований, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации;

о) протоколы исследований, указанных в подпунктах "а" - "г" пункта 2.2. настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации (при наличии).

В случае если протоколы исследований, указанных в подпунктах "а" - "г" пункта 2.2 настоящей Методики, не представлены заявителем, данные исследования проводятся организацией, осуществляющей экспертизу.

Заявитель вправе представить любую иную информацию по своему усмотрению.

2.2. Проведение испытаний ГМО, предназначенного для производства кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные ГМО, осуществляется путем следующих исследований предоставленных заявителем образцов штаммов ГМО и штамма-реципиента:

а) токсикологических исследований ГМО: токсикокинетика, генотоксичность, результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах) и целевых продуктивных животных, а также острой пероральной токсичности рекомбинантных белков, в эксперименте на грызунах;

б) аллергологических исследований, в том числе о потенциальной аллергенности ГМО; о потенциальной аллергенности рекомбинантных белков или небелковых веществ, полученных с использованием ГМО - продуцентов, в иммунохимических исследованиях in vitro;

в) биоинформатического анализа: подтверждение отсутствия незаявленных генов устойчивости к антибиотикам и выявление гомологии рекомбинантного белка с последовательностями токсических белков, белков, обладающих фармакологической или иной биологической активностью, при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank (для ГМО, предназначенных для производства пробиотиков);

г) исследование патогенных свойств и вирулентности ГМО на лабораторных животных (свободных от специфических патогенов мышах, цыплятах) с определением летальной дозы для 50% лабораторных животных;

д) осуществляется оценка чувствительности методики идентификации ГМО, по результатам проверки которой оформляется протокол с указанием пригодности или непригодности методики. Протокол с указанием пригодности методики оформляется в случае, если методика имеет высокую чувствительность (не менее 104 геномных эквивалентов/мл). В противном случае оформляется протокол о непригодности методики.

е) изучение микробиологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных (в отношении ГМО-бактерий);

ж) исследование стабильности ГМО при пассировании на жидких и плотных питательных средах с последующим через 7 пассажей тестированием биохимических свойств (в отношении ГМО-бактерий, простейших, грибов);

з) исследование жизнестойкости ГМО на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке;

и) исследование инвазивности ГМО;

к) исследование антагонистической или симбиотической активности ГМО с представителями резидентной микрофлоры кишечника;

л) иммунологические исследования ГМО на мышах линий СВА.

2.3. Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 2.1. настоящей Методики.

В случае если исследования проводятся организацией, осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не может превышать 250 рабочих дней с момента представления заявителем образцов ГМО и исходного организма.

2.4. По результатам экспертизы выдается заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду.

В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО, в том числе при производстве конкретного вида кормов и кормовых добавок, при соблюдении которых негативное воздействие ГМО на окружающую среду отсутствует.

2.5. В случаях, не предусмотренных пунктом 2.4. настоящей Методики, выдается заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

III. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов.

3.1. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, включает анализ представленных заявителем документов и данных, предусмотренных подпунктами "а" - "з" и "н" пункта 2.1. настоящей Методики, а также:

а) копии отчетов исследований кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные штаммы ГМО (при наличии);

б) информацию о регистрации кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, в государствах-членах Евразийского экономического союза, иных государствах, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов

б) протоколы исследований, указанных в подпункте "г" и "д" пункта 3.2. настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации (при наличии).

В случае если протоколы исследований, указанных в пункте 3.2 настоящей Методики, не представлены заявителем, данные исследования проводятся организацией, осуществляющей экспертизу.

3.2. В отношении ГМО, предназначенных для производства кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособный ГМО, проводятся следующие исследования образцов кормов и кормовых добавок, представленных заявителем в количестве, необходимом для проведения исследований:

а) осуществляется оценка чувствительности методики идентификации ГМО, по результатам проверки которой оформляется протокол с указанием пригодности или непригодности методики. Протокол с указанием пригодности методики оформляется в случае, если методика имеет высокую чувствительность (не менее 104 геномных эквивалентов/мл). В противном случае оформляется протокол о непригодности методики;

б) осуществляется проверка кормов и кормовых добавок на наличие генно-модифицированных нуклеиновых кислот штамма ГМО в представленных образцах;

в) исследование образцов кормов и кормовых добавок на отсутствие жизнеспособного ГМО с использованием микробиологических методов;

г) токсикологических исследований образцов кормов и кормовых добавок: результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах) и целевых продуктивных животных, а также острой пероральной токсичности рекомбинантных белков, в эксперименте на грызунах;

д) биоинформатического анализа: подтверждение отсутствия незаявленных генов устойчивости к антибиотикам и выявление гомологии рекомбинантного белка с последовательностями токсических белков, белков, обладающих фармакологической или иной биологической активностью, при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank;

е) иммунологические исследования образцов кормов и кормовых добавок на мышах линий СВА.

3.3. Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 3.1. настоящей Методики.

В случае если исследования проводятся организацией, осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не может превышать 150 рабочих дней с момента представления заявителем образцов кормов и кормовых добавок.

3.4. По результатам экспертизы организацией, проводящей экспертизу, выдается заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду.

В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО, в том числе при производстве конкретного вида кормов и кормовых добавок, при соблюдении которых негативное воздействие ГМО на окружающую среду отсутствует.

3.5. В случаях, не предусмотренных пунктом 3.4. настоящей Методики, выдается заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

IV. Экспертиза кормов и кормовых добавок, полученных с использованием ГМО и не содержащих ДНК генетически модифицированных микроорганизмов

4.1. Экспертиза кормов и кормовых добавок, полученных с использованием ГМО и не содержащих ДНК генетически модифицированных микроорганизмов, включает анализ представленных заявителем документов и данных, предусмотренных подпунктами "а" - "д", "ж" и "н" пункта 2.1. настоящей методики, а также:

а) информацию о регистрации кормов и кормовых добавок, не содержащих ДНК генетически модифицированных микроорганизмов, в государствах-членах Евразийского экономического союза, иных государствах, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения кормов и кормовых добавок, не содержащих ДНК генетически модифицированных микроорганизмов

б) протоколы молекулярно-генетических исследований, проведенных в организациях (испытательных лабораториях).

В случае если указанные протоколы не представлены заявителем, исследования ГМО проводятся организацией, осуществляющей экспертизу. Требования к проведению исследований приведены в Приложении к настоящей методике.

4.2. В отношении ГМО, предназначенных для производства кормов и кормовых добавок, не содержащих генно-модифицированных нуклеиновых кислот штамма ГМО, проводятся следующие исследования образцов кормов и кормовых добавок, представленных заявителем в количестве, необходимом для проведения исследований:

а) осуществляется оценка чувствительности методики идентификации ГМО, по результатам проверки которой оформляется протокол с указанием пригодности или непригодности методики. Протокол с указанием пригодности методики оформляется в случае, если методика имеет высокую чувствительность (не менее 104 геномных эквивалентов/мл). В противном случае оформляется протокол о непригодности методики;

б) осуществляется проверка кормов и кормовых добавок на отсутствие генно-модифицированных нуклеиновых кислот штамма ГМО в представленных образцах;

в) токсикологических исследований образцов кормов и кормовых добавок: результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах) и целевых продуктивных животных, а также острой пероральной токсичности рекомбинантных белков, в эксперименте на грызунах

Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 4.1. настоящей методики.

4.3. По результатам экспертизы в случае отсутствия в кормах и кормовых добавках, полученных с применением ГМО, рекомбинантной ДНК, выдается заключение.

V. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих и/или полученных с использованием ГМО растительного происхождения не способного к репродукции.

5.1 Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих и/или полученных с использованием ГМО растительного происхождения, включает анализ представленных заявителем документов и данных:

а) описание свойств, приобретенных организмом в результате модификации и сведений об исходном организме (таксономическая характеристика с указанием метода идентификации);

б) кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;

в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации (при наличии), характеристики встроенных или измененных генов;

г) информации о генетической модификации: описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки, расположении рекомбинантной ДНК (хромосома, органелла, плазмида), включая фланкирующие последовательности, характеристику экспрессии встроенных генов в процессе онтогенеза растения, уровень экспрессии в различных тканях растения, различия с исходным организмом;

д) информации об организмах-донорах вносимых генов (таксономическая характеристика, данные о токсических, аллергенных свойствах, группа патогенности при наличии);

е) данных секвенирования вставки ГМО и бордерных последовательностей, не менее 100 нуклеотидов по флангам генома реципиента (при наличии);

ж) описания методики, позволяющей идентифицировать генетическую модификацию, в том числе описание нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов и условий ПЦР;

з) протоколы молекулярно-генетических исследований, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации;

и) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок, их содержащих в Российской Федерации и/или государствах-членах Евразийского экономического союза и иных государствах;

к) оценка композиционной эквивалентности проводится на основании сведений, представленных заявителем, о результатах сравнения химического состава ГМО с химическим составом его традиционного аналога по следующим параметрам с учетом, что показателей варьируется в зависимости от свойств изучаемого растительного организма: - содержание белка;

- аминокислотный состав;

- содержание жира;

- жирнокислотный состав;

- углеводный состав;

- содержание витаминов;

- содержание макро- и микроэлементов;

- содержание биологически активных веществ;

- содержание аллергенов;

- содержание антропогенных и природных контаминантов (токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, радионуклидов, вредных примесей);

- содержание антинутриентов и других веществ, характерных для растительных организмов данного вида.

Оценка композиционной эквивалентности ГМО и его традиционного аналога проводится с учетом биологических колебаний значений показателей, характерных для растений данного вида.

л) протоколы исследований, указанных в подпунктах "а" - "и" пункта 5.2. настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации (при наличии).

В случае если протоколы исследований, указанных в подпунктах "а" - "и" пункта 5.2 настоящей Методики, не представлены заявителем, данные исследования проводятся организацией, осуществляющей экспертизу.

Заявитель вправе представить любую иную информацию по своему усмотрению.

5.2. Проведение испытаний ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих и/или полученных с использованием ГМО растительного происхождения не способного к репродукции, осуществляется путем следующих исследований, предоставленных заявителем образцов ГМО и образцов традиционного аналога ГМО:

а) токсикологических исследований ГМО: токсикокинетика, генотоксичность, результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах) и целевых продуктивных животных, а также острой пероральной токсичности рекомбинантных белков, в эксперименте на грызунах;

б) аллергологических исследований включающих:

- результаты оценки аллергенных свойств одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (сравнение с известными аллергенами с использованием баз данных, содержащих информацию о трехмерной структуре и функции известных аллергенов и родственных им белков);

- определение аллергенности белка в иммунохимических исследованиях in vitro;

- определение устойчивости к воздействию протеолитических ферментов (пепсина);

в) биоинформатического анализа: результаты оценки безопасности одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белка; наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической, или иной биологической активностью (при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank);

г) изучение стабильности белка при обработке, хранении, технологической переработке; влияние температуры и рН, возможные модификации и/или образование стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивость белка к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте in vitro; исследования острой пероральной токсичности белка в эксперименте на грызунах;

д) оценка безопасности продукта (данные 90-дневных исследований на грызунах, данные исследований на молодых быстро растущих животных цыплятах-бройлерах, ягнятах - в случае если такие исследования проводились.

е) оценка чувствительности методики идентификации ГМО, по результатам проверки которой оформляется протокол с указанием пригодности или непригодности методики. Протокол с указанием пригодности методики оформляется в случае, если методика имеет высокую чувствительность (не менее 104 геномных эквивалентов/мл). В противном случае оформляется протокол о непригодности методики.

ж) исследование репродуктивной способности образцов ГМО растительного происхождения;

з) анализ результатов других исследований, включающих: результаты определения кормовой ценности (так как заданные и незаданные эффекты генетической модификации могут являться причиной изменения баланса макро- и микронутриентов, и, следовательно, вести к изменению пищевой ценности продукта);

и) анализ результатов пострегистрационного мониторинга кормов и кормовых добавок, полученных с использованием данного ГМО, в стране-заявителе и других странах, осуществляемого с целью выявления незаданных эффектов генетической модификации, которые не могли быть обнаружены на стадии регистрационных исследований (при наличии).

5.3. Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 5.1. настоящей Методики.

В случае если исследования проводятся организацией, осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не может превышать 250 рабочих дней с момента представления заявителем образцов ГМО и не модифицированного аналога.

5.4. По результатам экспертизы выдается заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду.

В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО, в том числе при производстве конкретного вида кормов и кормовых добавок, при соблюдении которых негативное воздействие ГМО на окружающую среду отсутствует.

5.5. В случаях, не предусмотренных пунктом 5.4. настоящей Методики, выдается заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

VI. Проведение исследований для оценки биологической безопасности ГМО растительного происхождения, используемого для производства кормов и кормовых добавок.

6.1. В обязательном порядке заявитель предоставляет для исследования стандартные образцы ГМО и его традиционного аналога в количестве, достаточном для проведения необходимого объема исследований.

6.2. При оценке безопасности ГМО растительного происхождения учитываются результаты проведенных экспертами молекулярно-генетических исследований, включающих подтверждение присутствия в геноме ГМО заявленных чужеродных генов, исследований на наличие возможных недекларированных генетических модификаций.

Срок проведения исследования: не более 45 дней.

6.3. Гигиенические исследования ГМО растительного происхождения включают определение показателей качества и безопасности. Изучаемые показатели: содержание токсичных элементов; микотоксинов; пестицидов; радионуклидов; вредных примесей; микробиологические показатели.

Перечень показателей безопасности определяется на основании требований Технических регламентов и санитарно-гигиенических норм и правил, утвержденных на территории РФ.

Срок проведения исследования: не более 45 дней.

6.4 Оценка композиционной эквивалентности ГМО растительного происхождения и традиционного аналога проводится с целью исключения риска снижения их биологической полноценности. Сравниваются кормовая ценность нового и традиционного продукта (содержание белка, аминокислотный состав, содержание жира, жирнокислотный состав, углеводный состав, содержание витаминов, макро - и микроэлементов, специфических компонентов, биологически активных веществ, антинутриентов и других веществ, характерных для растений данного вида); нормы потребления; способы использования; биодоступность и переваримость; влияния на микрофлору желудочно-кишечного тракта. В случае если заявителем представлены исчерпывающие данные по композиционной эквивалентности, исследования могут быть ограничены определением влажности, золы, содержания белка, жира, углеводов, пищевых волокон. Если в результате оценки композиционной эквивалентности не обнаруживается отличий ГМО продукции от традиционных аналогов, то ее считают полностью безвредной для здоровья животных. В случае если генетическая модификация направлена на изменение химического состава ГМО, должны быть проведены исследования, подтверждающие заявленные изменения.

6.5. Токсикологические исследования линий ГМО растительного происхождения на лабораторных животных на двух поколениях с изучением репродуктивной токсичности.

Изучение репродуктивной токсичности и токсичности ГМО проводится в эксперименте на крысах линии Вистар. Токсикологические исследования включают изучение репродуктивной функции крыс поколения F0 , пре- и постнатальное развитие потомства поколения F1, а также оценку физиолого-биохимических показателей крыс поколения F0, F1 (на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения). Эксперимент проводится на самцах и самках крыс (исходный возраст 25-30 дней). Животных (исходно - не менее 110 самок и 50 самцов) делят на 2 группы, группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО; группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО. Количество животных в группах в начале эксперимента должно составлять не менее 55 самок и 25 самцов. Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

Исследуются следующие показатели: общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова) - каждые 2 дня; поедаемость корма - ежедневно; масса тела - каждые 7 дней. Отбор материала для гематологических, биохимических, морфологических исследований, определения массы внутренних органов (головного мозга, сердца, селезенки, легких, тимуса, гипофиза, печени, почек, надпочечников и семенников) проводят не ранее, чем через 100 дней с начала эксперимента у самцов поколения F0 (не менее 15 крыс на группу).

Оценивают показатели:

- гематологические показатели крови: концентрация гемоглобина; гематокрит; общее количество эритроцитов; средний объем эритроцита (СОЭ); среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ); средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ); общее количество тромбоцитов; общее количество лейкоцитов; дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы);

- биохимические показатели крови: аланинаминотрансфераза (АЛТ); аспартатаминотрансфераза (АСТ); желчные кислоты; фосфатаза щелочная; билирубин общий; билирубин прямой; белок общий; альбумин; глобулин; креатинин; глюкоза; альфа-амилаза; липаза; лактатдегидрогеназа; общие липиды; триглицериды; холестерин; холинэстераза; мочевина; хлориды; натрий; фосфор; калий;

- общий анализ мочи; изучаемые показатели суточный диурез; цвет и прозрачность; относительная плотность; pH; белок; глюкоза; креатинин;

- биомаркеры cистемы антиоксидантной защиты (материал для исследований: эритроциты); изучаемые показатели активность ферментов антиоксидантной защиты: глутатионредуктазы; глутатионпероксидазы; супероксиддисмутазы; каталазы;

- биомаркеры cистемы антиоксидантной защиты (материал для исследований: кровь, печень); изучаемые показатели: содержание продуктов перекисного окисления липидов: малоновый диальдегид;

- cистема ферментов метаболизма ксенобиотиков (материал для исследований: печень); изучаемые показатели: активность ферментов 1-й и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков: общее содержание цитохрома Р-450; 7-этоксирезоруфин-О-деэтилаза; 7-пентоксирезоруфин-О-деэтилаза; UDP-глюкуронозилтрансфераза; глутатионтрансфераза;

- cистема регуляции апоптоза, стабильность мембран лизосом (материал для исследований: печень); изучаемые показатели: общая и неседиментируемая активность-ферментов лизосом, галактозидаза; глюкуронидаза; арилсульфатазы А и В.

Для погибших в течение эксперимента животных проводят морфологические исследования кожи; головного мозга; сердца; аорты; селезенки; легких. Выполняют макроскопические и микроскопические исследования, обзорные гистологические, морфометрический анализ на 30-й и 180-й дни эксперимента (плановый забор). Для поджелудочной железы; почек; семенников проводят микроскопические (электронно-микроскопические), гистохимические; иммуногистохимические исследования. Также возможны дополнительно морфологические исследования лимфатических узлов; тимуса; щитовидной железы; гипофиза; желудка, тонкой и толстой кишки; печени для установления причины смерти.

Срок проведения исследования: не более 90 дней.

6.6. Иммунологические исследования ГМО на лабораторных животных.

Иммунологические исследования ГМО, проводятся в эксперименте на мышах линий СВА (характеристика: высокочувствительны к введению эритроцитов барана и не чувствительны к гистамину и Salmonella typhimurium) и С57Bl/6 (характеристика: низкокочувствительны к введению эритроцитов барана, чувствительны к гистамину и Salmonella typhimurium). Исследования включают изучение иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:

- действие на гуморальное звено иммунитета в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;

- действие на клеточное звено иммунитета в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана;

- действие как сенсибилизирующего агента в тесте чувствительности к гистамину;

- действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).

Срок проведения исследования: не более 40 дней.

6.7. Аллергологические исследования ГМО растительного происхождения на лабораторных животных.

Потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровня циркулирующих сенсибилизирующих антител у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа "опыт") и его традиционный аналог (группа "контроль"). Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (ОВА) с последующим внутривенным (в/в) введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка.

Эксперимент проводится на крысах линии Вистар (половозрелые самцы, исходная масса тела 150-180 г). Животных делят на 2 группы, группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО; группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО. Количество животных в группе в начале эксперимента - не менее 25 особей в каждой группе. На протяжении эксперимента животные получают стандартный рацион вивария (на 1 крысу в день: крупа овсяная 2,5 г, зерновая смесь 14,0 г., хлеб 2 сорт 4,0 г., творог 2,0 г., рыбная мука 0,5 г, мясо 2 категории 4,0 г., морковь 8,0г., зелень 8,0г., рыбий жир 0,1г., дрожжи 0,1 г., NaCl 0,15г.; основные нутриенты белок 3,69 г. жир 1,28 г., углеводы 12,42 г.; энергия, 76,0 ккал). Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Замена ингредиентов рациона должна быть проведена с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности. Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных. Рацион не содержит яичного белка. Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении

На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют ОВА, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную ("бустерную") дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор ОВА в/в, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса. Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1-0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител. Проводят иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к ОВА.

Тяжесть реакции анафилактического шока в каждой из групп животных оценивают по анафилактическому индексу, учитывающему тяжесть реакции анафилаксии, и проценту летальных реакций анафилаксии.

Срок проведения исследования: не более 40 дней.

6.8. Генотоксикологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных. Оценка потенциальной генотоксичности ГМО включает выявление повреждений ДНК и выявление мутагенной активности в эксперименте in vivo. Метод выявления мутагенной активности основан на учете хромосомных аберраций в метафазных клетках пролиферирующих тканей. Регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет).

6.8.1. Исследуемые показатели:

- в основе метода выявления мутагенной активности лежит регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы. Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом. Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытной группах.

- регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет). Метод основан на регистрации различной подвижности ДНК и возможных фрагментов ДНК лизированных клеток, заключенных в агарозный гель, в постоянном электрическом поле. При этом ДНК мигрирует к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий "хвост кометы", параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК. Общая схема метода включает получение гель-слайдов (подложки), получение микропрепаратов, лизис, щелочную денатурацию, электрофорез, нейтрализацию/фиксацию, окрашивание и микроскопический анализ.

Микроскопический анализ проводят на эпифлуоресцентном микроскопе с соответствующими для конкретного красителя фильтрами при увеличении 200х - 400х. На каждый микропрепарат анализируют не менее 100 "ДНК-комет". Анализ "ДНК-комет" может проводиться визуально или с помощью программно-аппаратного комплекса.

6.9. Исследования репродуктивной токсичности ГМО проводятся в эксперименте на двух поколениях лабораторных животных и включают:

- изучение влияния на генеративную функцию;

- изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития.

Срок проведения исследования: не более двух лет.

6.9.1. Отчет по результатам исследований репродуктивной токсичности ГМО должен включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на внутриутробное развитие и процессы репродукции.

7. На основании экспертизы представленных документов и материалов и результатов проведенной оценки и исследований биологической безопасности, выдается заключение о возможности государственной регистрации и использования ГМО для производства кормов и кормовых добавок на территории Российской Федерации.